大腸埃希氏菌是人和動物腸道中正常菌群的重要組成部分。然而，某些特定型別（如致病性大腸桿菌）可引起從輕微腹瀉到致命性出血性腸炎、溶血性尿毒綜合征等嚴重疾病。因此，其檢測具有雙重意義：

1. 作為“衛生指示菌”：在食品、水等樣品中，其數量反映糞便污染程度和一般衛生狀況。

2. 作為“病原菌”：在臨床感染性標本中，其檢出和鑒定是明確感染病原、指導抗生素治療的關鍵。

對生物樣品中大腸埃希氏菌的檢測，是一個結合了分離培養、生化鑒定、血清分型、毒力基因檢測及藥敏試驗的系統性診斷過程。

一、檢測標準與指南

檢測活動遵循指南和標準，以確保準確性和可比性。

1. 臨床微生物學：美國臨床和實驗室標準協會指南、各醫院實驗室自建的標準操作規程。

2. 食品安全與水質：GB 4789.38-2012《食品安全標準 食品微生物學檢驗 大腸埃希氏菌計數》、GB/T 5750.12-2023《生活飲用水標準檢驗方法 微生物指標》。

3. 參考：ISO標準系列。

二、完整檢測流程（以臨床感染標本為例）

臨床實驗室對大腸埃希氏菌的檢測通常遵循“涂片鏡檢 → 分離培養 → 初步鑒定 → 確認鑒定 → 藥敏試驗”的路徑。

第一步：樣本采集、運送與前處理

• 關鍵：無菌操作，避免污染；及時送檢（尤其是糞便樣本）。

• 樣本類型：糞便、中段尿、血液、膿液、腦脊液、呼吸道分泌物等。

• 前處理：部分樣本（如糞便、痰液）需勻質化。

第二步：直接涂片鏡檢（部分樣本）

• 目的：快速評估樣本中細菌的總體情況（如尿液中白細胞和細菌數量）。

• 方法：革蘭染色。大腸埃希氏菌為革蘭陰性桿菌，兩端鈍圓，多呈單個散在分布。

第三步：分離培養與初步鑒定（核心步驟）

這是從混合菌群中分離出大腸埃希氏菌純菌落的關鍵。

1. 培養基選擇：

   • 非選擇性/基礎培養基：血瓊脂平板。觀察菌落形態（通常為灰白色、光滑、濕潤、邊緣整齊的中等大小菌落，部分菌株有β溶血）。

   • 選擇性/鑒別培養基：

     • 麥康凱瓊脂/中國藍瓊脂：首選鑒別培養基。大腸埃希氏菌因發酵乳糖產酸，在MAC上呈桃紅色或粉紅色菌落，在CBM上呈藍色菌落。

     • 伊紅美藍瓊脂：菌落呈紫黑色、有金屬光澤。

     • 山梨醇-麥康凱瓊脂：用于篩選O157:H7等不發酵山梨醇的致瀉性大腸埃希氏菌（菌落為無色）。

2. 培養條件：35±2°C，需氧環境，培養18-24小時。

第四步：生化鑒定確認

對選擇性平板上特征性菌落進行純化后，進行系統生化鑒定。

1. 經典生化試驗組合：

   • 吲哚試驗：陽性（產生吲哚）。

   • 甲基紅試驗：陽性。

   • V-P試驗：陰性。

   • 檸檬酸鹽利用試驗：陰性。

   • 典型反應模式：IMViC（++--）。

   • 動力試驗：通常有動力。

2. 自動化/商品化鑒定系統：

   • 主流方法：使用VITEK 2 GN卡、BD Phoenix、API 20E等全自動或半自動微生物鑒定系統，快速（4-24小時）得到高精度的種水平鑒定結果。

第五步：血清學分型與毒力基因檢測（針對致病性鑒定）

當懷疑為致病性大腸桿菌時，需進行進一步分型。

1. 血清學分型：基于O抗原（菌體）和H抗原（鞭毛）進行分型（如O157:H7）。使用特異性抗血清進行凝集試驗。

2. 毒力基因檢測：

   • 方法：多重PCR或基因芯片，檢測編碼特定毒力因子的基因。

   • 主要類型與靶基因：

     • 腸致病性大腸桿菌 ：eae、bfp

     • 產腸毒素大腸桿菌 ：lt、st

     • 腸侵襲性大腸桿菌 ：ipaH

     • 腸出血性大腸桿菌 ：stx1、stx2、eae

     • 腸集聚性大腸桿菌 ：aggR

第六步：藥物敏感性試驗

對臨床分離株進行藥敏試驗，指導臨床用藥。

• 方法：紙片擴散法或微量肉湯稀釋法，通常使用自動化儀器（如VITEK 2 AST卡）。

• 報告：根據CLSI或EUCAST折點標準，報告為敏感、中介或耐藥。特別關注ESBLs和碳青霉烯酶的檢測。